人BLyS 基因克隆、表达和抗人BLyS 单克隆抗体的制备

Abstract

【目的】研制抗人BLyS 单克隆抗体, 以进一步探讨人BLyS 与自身免疫性疾病的关系。【方法】将人BLy S 基因 克隆到融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-1 中, 构建重组质粒pGEX-4T-1/hBLyS , 用此重组质粒转化大肠杆菌BL21, 加IPTG 诱导大肠杆菌表达GST-hBLy S 融合蛋白, 用此融合蛋白免疫BALB/c 鼠, 取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合, 用ELISA 法筛选阳 性克隆, 用免疫印迹和流式细胞仪进一步鉴定抗体的特异性。【结果】重组质粒双酶切结果和DNA 序列测定以及表达蛋白 SDS-PAGE 电泳结果表明, pGEX-4T-1/ hBLyS 重组质粒可以正确表达GST-hBLyS 融合蛋白;ELISA 、免疫印迹和流式细胞仪 检测结果表明, 1c6 杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可以特异性结合人T 淋巴细胞膜表面BLyS 的膜外区, 属于IgG2b 亚类。 【结论】所获得的单克隆抗体具有能够结合人T 淋巴细胞上的BLyS 特异性, 可用于研究人BLyS 与自身免疫性疾病的关系。