Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban (Jan 2018)
miR-18a过表达及抑制表达人鼻咽癌细胞株的构建
Abstract
【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的人鼻咽癌细胞系，为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中 的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中，DNA 测序鉴定；将构建好的载体转染293T细胞，获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体，感染人鼻咽癌细 胞CNE1和CNE2，嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系，PCR及western blot鉴 定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR-18a干扰载体及过表达载体，滴度均为3×10 8 TU/mL；转染miR-18a 抑制表达的慢病毒载体的CNE1和CNE2中ATM表达增高；与对照病毒转染相比，转染miR-18a过表达慢病毒载 体的CNE1（20.3倍，P<0.01）和CNE2（122.5倍，P<0.01）中miR-18a表达显著增高，靶蛋白ATM表达下调。【结论】 成功构建人miR-18a慢病毒抑制表达和过表达载体，并获得相应的慢病毒稳转人鼻咽癌细胞株。
